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 基于酰胺化的化学标记技术在磷酸化多肽分析中的应用


    邹伦妃 张启伟 肖琛 熊淼 郑琦
江汉大学光电化学材料与器件教育部重点实验室


摘要：蛋白质的翻译后修饰复杂多样，通过激酶与磷酸酶调控的磷酸化是最广泛、最重要的翻译后修饰之一。定量分析磷酸化蛋白质的动态变化，有利于阐明磷酸化修饰调控生命活动的机理，了解其在实现生物功能过程中的作用。以质谱为核心的分析方法是当前蛋白质翻译后修饰研究中最常用的定量技术，主要包括无标记定量、内标绝对定量、化学标记等。本文将一种用于蛋白质糖基化分析的标记方法应用于磷酸化多肽的研究。使用二甲胺标记蛋白质的所有酶解肽段，被酰胺化的羧基可提高TiO2对磷酸化多肽的富集特异性以及液相色谱-质谱(LC-MS)检测的灵敏度。稳定同位素标记实验表明，该方法适用于高通量磷酸化多肽的相对定量分析。基于二甲胺衍生的化学标记法在磷酸化多肽的质谱分析中具有优势，有望成为生物组织中磷酸化蛋白质研究的有力工具。


关键词： 磷酸化;酰胺化;稳定同位素标记;液相色谱-质谱(LC-MS);
基金资助： 国家自然科学基金（21976069）； 江汉大学科技创新专项（2021KJZX002）；
专辑： 基础科学;工程科技Ⅰ辑
专题： 生物学;化学
分类号： Q503;O657.63

邹伦妃, 张启伟, 肖琛, 熊淼, 郑琦. 基于酰胺化的化学标记技术在磷酸化多肽分析中的应用[J]. 质谱学报, 2022, 43(4): 463-472.

基于酰胺化的化学标记技术在磷酸化多肽分析中的应用

邹伦妃, 张启伟, 肖琛, 熊淼, 郑琦.

江汉大学光电化学材料与器件教育部重点实验室



文章目录
1 实验部分
    1.1 主要仪器与装置
    1.2 主要材料与试剂
    1.3 实验条件
        1.3.1 色谱条件
        1.3.2 质谱条件
    1.4 实验方法
        1.4.1 羧基的酰胺化
        1.4.2 磷酸化多肽的富集
        1.4.3 稳定同位素标记
        1.4.4 数据分析
2 结果与讨论
    2.1 衍生原理
    2.2 衍生化处理的影响
    2.3 稳定同位素标记
    2.4 相对定量范围和准确度
    2.5 自缩合反应的影响

3 结论


邹伦妃, 张启伟, 肖琛, 熊淼, 郑琦. 基于酰胺化的化学标记技术在磷酸化多肽分析中的应用[J]. 质谱学报, 2022, 43(4): 463-472.

基于酰胺化的化学标记技术在磷酸化多肽分析中的应用

邹伦妃, 张启伟, 肖琛, 熊淼, 郑琦.

江汉大学光电化学材料与器件教育部重点实验室


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